Efa fantatra ny filaharan'ny génomika amin'ny ankamaroan'ny viriosy.Probe asidra nucleic izay ampahany fohy amin'ny ADN natao hitambatra miaraka amin'ny ADN virtoaly mifameno na ampahany RNA.Ny fihetsiketsehan'ny rojo polymerase (PCR) dia teknika mahomby kokoa amin'ny fitiliana virosy.Novolavolaina vao haingana ny fomba diagnostika avo lenta.
A. Teknôlôjia hybridization asidra nucleic
Ny hybridization asidra nucleic, indrindra indrindra fa ny Southern blotting (Atsimo) sy ny Northern blotting (Avaratra), dia teknolojia vaovao mivoatra haingana amin'ny sehatry ny diagnostika virus.Ny anton'ny fitsirihana ny hybridization dia ny fampiasana ampahany fohy amin'ny ADN (antsoina hoe "probe") natao hitambatra miaraka amin'ny ADN viral na RNA fizarana.Amin'ny alàlan'ny hafanana na ny fitsaboana alkaline, ny ADN na RNA kendrena misy tady roa dia misaraka ho tady tokana ary avy eo dia tsy mihetsika amin'ny fanohanana mafy.Aorian'izany dia ampiana ny probe ary mifangaro amin'ny ADN na RNA kendrena.Satria voamarika amin'ny isotope na nuclide tsy radioaktifa ny probe, ny ADN na RNA kendrena dia azo tsikaritra amin'ny alàlan'ny autoradiography na amin'ny rafitra biotin-avidin.Satria ny ankabeazan'ny fototarazo virtoaly dia nokoleina sy nozaraina, dia azo fantarina amin'ny alàlan'ny filaharan'ny viriosy ho toy ny probe ao amin'ny santionany.Amin'izao fotoana izao, ny fomba hybridization dia ahitana: dot blot , in situ hybridization amin'ny sela , ADN blotting (ADN) (Southern blot) ary RNA blotting (RNA) (Northern blot).
B.PCR Technology
Tao anatin'ny taona vitsivitsy izay, andiana teknika fanamafisana asidra nokleika in vitro no novolavolaina mifototra amin'ny PCR, mba hitsapana ireo viriosy tsy saro-pady na tsy azo ambolena.Ny PCR dia fomba iray ahafahana mampifanaraka ny filaharan'ny ADN manokana amin'ny alàlan'ny fanehoan-kevitra polymerase in vitro.Ny dingan'ny PCR dia ahitana tsingerina mafana amin'ny dingana telo: denaturation, annealing, ary fanitarana Amin'ny hafanana avo (93 ℃ ~ 95 ℃), ny ADN mipetaka roa dia misaraka amin'ny tady ADN roa;avy eo amin'ny mari-pana ambany (37 ℃ ~ 60 ℃), ny primers nucleotide roa synthesized dia mipetaka amin'ny ampahany ADN mifameno;fa amin'ny mari-pana sahaza ho an'ny Taq enzyme (72 ℃), ny synthesis ny rojo ADN vaovao dia manomboka amin'ny 3' voalohany amin'ny fampiasana ny ADN mifameno ho modely ary ny nucleotide tokana ho fitaovana.Noho izany, aorian'ny tsingerina tsirairay, dia azo ampitomboina ho rojo roa ny rojo ADN iray.Amin'ny famerimberenana io dingana io, ny rojo ADN tsirairay avy ao anatin'ny tsingerina iray dia azo ampiasaina ho modely amin'ny tsingerina manaraka, ary ny isan'ny rojo ADN dia avo roa heny isaky ny tsingerina, izay midika fa ny famokarana PCR dia ampitomboina amin'ny hafainganam-pandeha 2n log.Aorian'ny tsingerina 25 ka hatramin'ny 30, ny famokarana PCR dia fantatra amin'ny alàlan'ny electrophoresis, ary ny vokatra ADN manokana dia azo jerena amin'ny hazavana UV (254nm).Ho an'ny tombontsoany manokana, ny fahatsapana ary ny fanamorana, ny PCR dia noraisina tamin'ny fitiliana klinika momba ny areti-mifindra maro toy ny HCV, VIH, CMV, ary HPV.Satria ny PCR dia tena saro-pady, afaka mamantatra ny ADN amin'ny viriosy amin'ny haavon'ny fg, ny fandidiana dia tokony hatao amim-pitandremana mba hisorohana ny diso.Fanampin'izany, ny vokatra tsara amin'ny fitsapana asidra nokleika dia tsy midika fa misy viriosy mifindra amin'ny santionany.
Miaraka amin'ny fampiharana be dia be ny teknika PCR, ny teknika sy ny fomba vaovao dia novolavolaina mifototra amin'ny teknika PCR ho an'ny tanjona fitsapana samihafa.Ohatra, ny PCR quantitative amin'ny fotoana tena izy dia afaka mamantatra ny viriosy;in situ PCR dia ampiasaina hamantarana ny otrikaretina amin'ny tavy na sela;Ny PCR nested dia afaka mampitombo ny specificity ny PCR.Anisan'izany, ny PCR quantitative amin'ny fotoana tena izy dia novolavolaina haingana kokoa.Teknika vaovao maro, toy ny TaqMan hydrolysis probe, hybridization probe, ary molecular beacon probe, no natambatra ho teknika PCR quantitative tena izy, izay ampiasaina betsaka amin'ny fikarohana klinika.Ankoatra ny hamantarana marina ny viriosy ao amin'ny fluidin'ny marary, ity fomba ity dia azo ampiasaina koa mba hamantarana ny mutant mahazaka zava-mahadomelina.Noho izany, ny PCR amin'ny fotoana tena izy dia ampiharina indrindra amin'ny fanombanana ny vokatry ny fitsaboana sy ny fanaraha-maso ny fandeferana zava-mahadomelina.
C. Fikarohana avo lenta amin'ny asidra nokleika viriosy
Mba hanomezana fahafaham-po ny filana fitiliana haingana ny areti-mifindra vaovao mipoitra, dia napetraka ny fomba fitiliana avo lenta, toy ny chips ADN (ADN).Ho an'ny puce ADN, ny probe manokana dia atambatra ary mipetaka amin'ny poti-silikonina kely amin'ny hakitroky avo be mba hamoronana microarray DNA probe (ADN) izay azo ampifandraisina amin'ny santionany.Ny mariky ny hybridization dia azo alaina amin'ny alàlan'ny mikraoskaopy confocal na scanner laser ary karakarain'ny ordinatera ary azo alaina ny angon-drakitra lehibe momba ny fototarazo samihafa.Misy karazany roa ny chip ADN.Ny "puce synthesis" dia toy izao manaraka izao: ny oligonucleotides manokana dia atambatra mivantana amin'ny chips.Ny iray hafa dia ny chip pool DNA.Ny fototarazo klona na ny vokatra PCR dia atao pirinty amin'ny slide.Ny tombony amin'ny teknôlôjia chip ADN dia ny fitiliana miaraka amin'ny filaharan'ny ADN marobe.Ny kinova farany amin'ny chip detection pathogen dia afaka mamantatra otrik'aretina mihoatra ny 1700 indray mandeha.Ny teknolojia chip ADN dia namaha ny olan'ny fomba hybridization asidra nokleika nentim-paharazana ary manana fampiharana midadasika amin'ny fitiliana virosy sy fandalinana epidemiolojika.
Fotoana fandefasana: Dec-23-2020